ELISA試劑盒的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體可經過共價鍵與酶銜接構成酶結合物，ELISA試劑盒而此種酶結合物仍能堅持其免疫學和酶學活性；
（2）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表，可能是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性部分相互吸附，并堅持其免疫學活性；
（3）酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可依據參加底物的顏色反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且顏色反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因而，能夠按底物顯色的程度顯現實驗成果。法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，ELISA試劑盒依據現已運用的成果，認為法具有活絡、特異、簡略、快速、穩定及易于自動化操作等特色。不只適用于臨床標本的查看，并且因為一天之內能夠查看幾百甚至上千份標本,因而，也適合于血清流行病學調查。
ELISA試劑盒因而含雜質較多的抗原也可選用捕獲包被法,實驗的特異性、敏感性均由此得以改進，重復性亦佳。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的作用于。可將聚苯乙烯板先經紫外線照耀（例如30W紫外燈，75cm照耀12小時），以添加其吸附性能。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，ELISA試劑盒而遍及的固相載體一般不能直接與核酸結合。換言之，包被便是抗原或抗體結合到固相載體外表的進程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出，在這種情況下，直接包被作用不佳，能夠選用直接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，這以后經過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。